為了排除肽的非特異性標(biāo)記導(dǎo)致觀察到更多的EpCAM簇的可能性，我們將PSmOrange融合到EpCAM中，并在HEK293T細(xì)胞中表達(dá)該結(jié)構(gòu)，HEK293T細(xì)胞是EpCAM不表達(dá)細(xì)胞。對融合PSmOrange-EpCAM的HEK293T細(xì)胞同時(shí)進(jìn)行多肽標(biāo)記后進(jìn)行雙色成像，并采用基于坐標(biāo)的共定位（CBC）方法分析共定位（如圖）。從統(tǒng)計(jì)結(jié)果來看，CBC分布趨于1，表明多肽具有良好的識別特異性。
簡單地說，dSTORM實(shí)現(xiàn)了EpCAM在細(xì)胞膜上超分辨成像。重構(gòu)的圖像和統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，多肽具有較強(qiáng)的識別EpCAM蛋白和區(qū)分不同簇的能力。這可以從兩個(gè)方面來解釋。一方面，與抗體（直徑10-15 nm）相比，肽具有小尺寸（直徑2-5 nm），導(dǎo)致較小的空間位阻，使細(xì)胞表面蛋白更容易識別。另一方面，大多數(shù)抗體有多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，在一定程度上可以誘導(dǎo)膜蛋白的交聯(lián)，而肽只有一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，肽與靶蛋白的結(jié)合比例為1:1，因此，肽分子可作為一種替代抗體的理想探針應(yīng)用于超分辨率成像。
 
如圖， 多肽標(biāo)記特異性檢驗(yàn)。用pcDNA3.1-PSmOrange-EpCAM轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，同時(shí)用Cy3連接的肽標(biāo)記。微球校正x-y漂移和紅綠通道之間的光學(xué)配準(zhǔn)。原始圖像中標(biāo)尺為5 μm，在放大圖像中標(biāo)尺為1 μm（i，ii）。用CBC分析了共定位參數(shù)。