我們首先比較了兩種探針的標記密度,結(jié)果顯示,對于頂膜表面來說,抑制劑探針單位面積的標記密度達到2306152m-2,抗體只有1902102m-2,對于基底膜表面來說,這兩種探針的標記密度差異達到801m-2,表明抑制劑探針能提供更好密度的PSMA識別能力,尤其對于細胞膜基底膜表面的PSMA,抗體存在不完全標記現(xiàn)象圖c
抗體通常用來標記膜蛋白,但抗體在標記時有些限制,大尺寸容易增加定位的不準確度。我們用抑制劑探針標記細胞頂膜表面(圖a)和基底膜表面的PSMA,同時與抗體做了比較(圖b)。我們首先比較了兩種探針的標記密度,結(jié)果顯示,對于頂膜表面來說,抑制劑探針單位面積的標記密度達到2306 ± 152 μm-2,抗體只有1902 ± 102 μm-2,對于基底膜表面來說,這兩種探針的標記密度差異達到801 μm-2,表明抑制劑探針能提供更好密度的PSMA識別能力,尤其對于細胞膜基底膜表面的PSMA,抗體存在不完全標記現(xiàn)象(圖c)。除此之外,SR-Tesseler的方法也用來提取這兩種探針識別的簇信息。無論頂膜表面還是基底膜表面,單位面積內(nèi)抗體識別的簇都要比抑制劑至少少一個(圖d),除此之外,通過比較兩種探針識別的簇面積,我們發(fā)現(xiàn),對于頂膜表面來說,抑制劑識別的簇面積要小于抗體,說明在飽和標記的情況下,抑制劑探針識別的簇要小于抗體;而在基底膜表面,抑制劑探針識別的簇面積大約是抗體的2倍,說明抑制劑的小尺寸使其比抗體更容易結(jié)合細胞膜基底膜表面的PSMA(圖e)。
以上結(jié)果表明了抑制劑探針具有更準確的蛋白識別能力。傳統(tǒng)的抗體尺寸比較大,并且為多價態(tài),在識別膜表面的蛋白時,容易導致交聯(lián)和潛在空間位阻,相比較而言,抑制劑探針尺寸較小,為單價態(tài),這些特征使其以高精度定位蛋白。因此,抑制劑探針可以識別更多的PSMA并且能更好的區(qū)分臨近的簇。

如圖 抑制劑探針和抗體探針標記的區(qū)別。抑制劑探針和抗體對細胞頂膜表面(a)和基底膜表面(b)PSMA的超分辨成像。標尺為5 μm。(c-e)對抑制劑探針和抗體標記的超分辨圖像的定量分析:每平方微米的定位數(shù)(c)、簇個數(shù)(d)和平均簇面積(e)。